从法律条文的明确规定来看，依据《中华人民共和国道路交通安全法实施条例》以及各地因地制宜制定的交通管理细则，隧道通常被划定为机动车的专属通行区域。
一般情况下，自行车作为非机动车，是被禁止进入隧道的。
以《西安市道路交通安全条例》为例，其中第三十八条第七款清晰规定，电动自行车、自行车等 “非机动车驾驶人应当遵守不得进入高速公路、城市快速路、机动车专用高架桥或者其他封闭的机动车专用道”，这里的隧道就包含在封闭的机动车专用道范畴内。许多城市也都有类似规定，旨在保障交通秩序与安全。
之所以禁止自行车进隧道，有着极为重要的安全因素。隧道内部空间相对封闭，机动车行驶速度普遍较快。
自行车本身行驶速度较低，且防护能力较差，一旦进入隧道，与高速行驶的机动车混行，极易引发交通事故。
一方面，机动车在隧道内行驶时，驾驶员的注意力主要集中在前方路况以及周边机动车动态上，对于突然出现的自行车，难以及时做出有效反应。
另一方面，隧道内空间有限，一旦发生碰撞，自行车骑行者几乎没有足够的避让空间，遭受严重伤害的风险极高，同时也可能对机动车驾乘人员的生命安全构成威胁。
如果自行车违反规定进入隧道，就属于交通违法行为。根据《中华人民共和国道路交通安全法》第八十九条，非机动车驾驶人违反道路交通安全法律、法规关于道路通行规定的，处警告或者五元以上五十元以下罚款;若非机动车驾驶人拒绝接受罚款处罚，相关部门可以扣留其非机动车。
不过，在实际执法过程中，对于初次违反且情节轻微、未造成严重后果的骑行者，交警可能会以批评教育为主;但对于多次违规或者在执法人员劝阻后仍执意闯入隧道的行为，则会严格按照法律规定进行处罚 。